过表达慢病毒

过表达慢病毒

目前很多课题研究都会使用到慢病毒载体,通过针对目的基因构建过表达慢病毒,转染到目的细胞或者动物体内,研究其目的基因上调对细胞或者动物某种通路或者疾病的影响。

一、实验操作步骤:

1. 根据目的基因相关信息(注:客户提供基因ID或者基因序列)获取目的基因;
2. 选择符合实验要求的载体;
3. 将目的基因构建到慢病毒载体获得含有目的基因的重组载体;
4. 对于测序正确的重组质粒,提取和纯化高质量(不含内毒素)的重组质粒;
5. 使用高效重组载体和慢病毒包装质粒共转染293T 细胞,进行病毒包装并收集上清液;
6. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒;
7. 使用病毒液感染293T细胞,测定病毒滴度。

二、客户须知

1. 提供与本实验相关的详细资料(含课题基本情况及预期达到的目的等);

2. 提供目的基因RefSeq ID;

3. 目的基因的表达克隆及相关信息;

4. 目的基因抗体及抗体使用说明书(如委托本中心的实验中涉及Western Blot实验);

5. 目的细胞及相关说明(如委托本中心的实验中涉及目的细胞的培养)。

三、结果提供

1. 目的基因慢病毒质粒测序文件,测序图谱,质粒结构图,序列比对文件;

2. 目的基因慢病毒质粒构建、包装、纯化实验报告;

3. 1ml过表达病毒,并赠送阴性对照(病毒滴度 ≥1 X 108 TU/ml),同时提供病毒滴度检测报告;

4. 功能检测的相关实验报告。

注:报告未能详尽的实验相关数据,本中心在能力范围内予以补充。

四、服务周期

2-3个月