重庆威斯腾转化研究院拥有专业的技术团队,先进的实验设施和完善的SPF级动物房。动物房配备IVC和EVC饲养笼,同时拥有分子克隆、干细胞培养、遗传工程模式生物基因组编辑、生理及病理分析等技术平台,可为生命科学研究和药物研发提供优质的基因工程模式生物活体模型以及表型分析检测、模型品系保存、遗传育种及繁育等服务。

合作领域



常用操作方法

DNA原核显微注射

DNA原核显微注射是指将外源DNA通过显微注射的方法注射到受精卵的原核内,注射DNA整合到小鼠受精卵的基因组中,并稳定遗传给后代。



ES打靶技术

ES打靶技术是使用小鼠胚胎干细胞(ES)结合同源重组技术制备基因改造小鼠。在小鼠的胚胎干细胞中,将外源DNA同源重组到靶向基因位点,以达到定点修饰基因的目的。通过筛选,将正确修饰的胚胎干细胞注射到小鼠囊胚,移植到代孕母鼠并生成嵌合体小鼠。最后通过与野生型小鼠交配得到具有生殖系遗传的后代,从而获得基因改造小鼠。


完全性基因敲除鼠

通过CRISPR /Cas9基因敲除技术,针对靶基因设计和构建gRNA与Cas9表达质粒,造成目的基因的功能区域被敲除,获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型。

移码突变鼠的建系原则与流程

1、通过针对靶基因不同位点设计、构建相应的一对gRNA质粒,体外转录为RNA后,与Cas9 mRNA一起原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代杂合子鼠;

2、F0代杂合子鼠与野生型鼠进行交配,获得PCR鉴定阳性的F1代杂合子鼠;

3、选择来自同一只F0代鼠,基因型一致的F1代鼠,达到性成熟后互配,可获得F2代鼠。对获得的F2代鼠进行PCR及测序鉴定,理论上,F2代鼠中25%为纯合子,50%为杂合子,25%为野生鼠。

片段基因敲除鼠的建系原则与流程

1、通过针对靶基因不同位点设计、构建相应的一对gRNA质粒,体外转录为RNA后,与Cas9 mRNA一起原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代杂合子鼠;

2、F0代杂合子鼠与野生型鼠进行交配,获得PCR鉴定阳性的F1代杂合子鼠;

3、选择来自同一只F0代鼠,基因型一致的F1代鼠,达到性成熟后互配,可获得F2代鼠。对获得的F2代鼠进行PCR及测序鉴定,理论上,F2代鼠中25%为纯合子,50%为杂合子,25%为野生鼠。

双(多)基因敲除鼠的建系原则与流程

1、通过针对两个靶基因分别设计、构建相应的gRNA质粒,体外转录为RNA后,与Cas9 mRNA一起原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代多基因杂合子鼠;

2、F0代杂合子鼠与野生型鼠进行交配,获得PCR和测序鉴定阳性的F1代双基因杂合子鼠;

3、选择双基因杂合子鼠进行杂交,获得F2代鼠。对获得的F2代鼠进行PCR及测序鉴定。

条件性基因敲除鼠

条件性基因敲除通常利用“Cre-LoxP”系统实现。首先把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端,以制备出有两个Loxp位点的floxed小鼠。floxed小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前,该基因正常表达;当floxed小鼠与组织特异性表达Cre酶的小鼠进行杂交后,可实现在特定的组织或细胞中敲除该基因,而在其它组织或细胞中该基因表达正常。

建系原则与流程

1、与野生型小鼠杂交:阳性CRISPR-Pro小鼠(+/flox)与野生型小鼠(+/+)杂交,获得F1代杂合子小鼠(+/flox);

2、挑选一对F1代杂合子小鼠(+/flox)进行自交,获得F2代纯合子小鼠(flox/flox)。

报告基因(Reporter/Tag)小鼠模型

指在目的基因的位置引入报告基因(如EGFP、mRFP、mCherry、mYFP或LacZ等)或标记基因的小鼠模型,通过报告基因的表达监控目的基因启动子的转录活性、监控目的蛋白的表达定位及细胞转运。

人源化(Humanized)小鼠模型

指带有功能性的人类基因、细胞、组织或器官的小鼠模型,通常被用做人类疾病体内研究的活体替代模型。本服务内容涉及到的是指带有功能性人类基因的小鼠模型。

Rosa26位点基因敲入小鼠模型

指在Rosa26位点引入某种基因的转基因小鼠模型。传统的转基因小鼠一般通过利用质粒进行受精卵原核注射的方式来制备,通常会得到多个品系(Founders)。不同品系由于质粒在染色体上的整合位点不同、拷贝数不同,不同品系之间不容易得到一致的结果。而且由于转基因小鼠传代后,转基因的拷贝数稀释以及基因沉默等原因,同一品系的表型在传代过程中也很容易丢失,造成实验结果不能重复。现在大部分实验室都是通过定点转基因的方式来制备转基因小鼠,其中用的最多的位点是Rosa26位点。

条件性点突变小鼠模型-诱导性(Inducible)

指在诱导剂的作用下,点突变能在特定的时间点被引入特定细胞或组织中目的基因位置的动物模型。诱导前表达野生型蛋白;诱导后,突变的蛋白在全身所有特定的细胞或组织中表达。

联系我们

欢迎来电、来函接洽!